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本制品是从大肠杆菌表达纯化获得的一种核糖核酸内切酶，可以特异性地水解DNA-RNA杂合链中的RNA。RNase H不能水解单链或双链DNA或RNA中的磷酸二酯键，即不能消化单链或双链DNA或RNA。RNase H广泛用于消化降解cDNA第二链合成后形成的DNA和RNA杂合双链中的RNA，或用于去除杂交到oligo (dT)上的mRNA poly(A)等。分子量约18.4kDa (单体)。

特异性消化DNA-RNA杂合链中的RNA，常用于cDNA第二链的合成。


DNA-RNA杂合链中去除RNA，例如cDNA第二条链合成前去除RNA；RT-PCR/RT-qPCR实验中，cDNA一链合成后去除RNA；通过互补的DNA序列实现对RNA的定点剪切；除去杂交到poly(dT)上的mRNA中的poly(A)；体外多腺苷酸化反应(polyadenylation reaction)产物研究；DNA-RNA杂合双链的鉴定。


纯化自携带编码大肠杆菌RNase H核糖核酸内切酶基因的E.coli重组菌株。


一个单位是指在50μL总反应体积中，37℃条件下，20min内从20pmol荧光标记的50bp RNA-DNA杂合链中产生1nmol核糖核苷酸所需的酶量。

组分	250U	1000U	5000U
RNase H(5U/μL)	50μL	200μL	1mL
10×Reaction Buffer	250μL	1mL	5mL

保存：-20℃，有效期2年。


不含DNA内切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。


10mM Tris-HCl，50mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，200μg/mL BSA，50% (v/v) glycerol,pH7.4@25℃。


10×Reaction Buffer：
500mM Tris-HCl，750mM KCl，30mM MgCl₂，100mM DTT,pH8.3@25℃。


65℃加热10分钟可使RNase H失活。金属离子螯合剂和巯基封闭剂均能抑制RNase H活性，加入EDTA至终浓度为至少5mM可抑制RNase H的酶活性。



图1.RNase H催化降解RNA:DNA杂合双链中RNA链的效果图。使用本制品或N公司的RNase H，在20μL反应体系中，加入400ng RNA:DNA杂合双链，以及图中指定量的RNase H，37℃孵育20分钟进行反应，反应完毕后立即冰浴3～5分钟并加入1μL 0.5M EDTA以终止反应。取出5μL反应液，加入1μL 6×DNA上样缓冲液(货号：YT418)，然后进行15%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(180V电泳45分钟)之后，用NadRed红色核酸染料(1:2000稀释)室温染色7分钟，随后拍照观察结果。如图所示，本制品与N公司的竞品相比，具有类似的催化效果。图中效果仅供参考。

• DNA-RNA杂合链中去除RNA：
  
  • 用反转录酶，例如BalbRT M-MuLV反转录酶或BalbRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)合成cDNA第一条链，70℃孵育10分钟终止反应。
    
  • 在冰浴上向已经合成第一条链的20μL反应体系中依次加入如下试剂：
    

    成分	用量
    10×Reaction Buffer	2μL
    无核酸酶去离子水	17.8μL
    RNase H(5U/μL)	0.2μL

  • 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
    
  • 37℃孵育1小时。
    
  • 加入2.5μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
    
  • 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。PCR产物DNA纯化试剂盒(货号：YT009)可以向百奥莱博订购。
    说明：其他情况DNA-RNA杂合链中去除RNA的条件可以参考上述条件进行。RNase H反应的pH范围约在7.5-8.3均可。
• 杂合链中RNA的去除和cDNA第二链的合成：
  
  • 用反转录酶，例如BalbRT M-MuLV反转录酶(货号：YT392)、BalbRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)(货号：YT393)或BalbRT cDNA第一链合成试剂盒(货号：YT395)合成cDNA第一条链，70℃孵育10分钟终止反应。
    
  • 在冰浴上向已经合成第一条链的20μL反应体系中依次加入如下试剂：
    

    成分	用量
    10×DPMI Reaction Buffer	8μL
    无核酸酶去离子水	68.8μL
    RNase H(5U/μL)	0.2μL
    DNA Polymerase I,E.coli	3μL(30U)

    
    注：10×DPMI Reaction Buffer：500mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃)，100mM MgCl₂，10mM DTT。
  • 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
    
  • 15℃孵育2小时。
    注：反应温度不能超过15℃。
    
  • 加入5μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
    
  • 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。PCR产物DNA纯化试剂盒(货号：YT009)可以向百奥莱博订购。
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• 其他用途请参考上述用途或相关文献资料进行。

• 解冻10×Reaction Buffer反应缓冲液时为什么有时会出现白色沉淀，如何解决?
  白色沉淀物是10×Reaction Buffer缓冲液中的DTT，解冻和混合后会再次悬浮。重新悬浮的缓冲液完全可以满足其预期用途。
  
• RNase H切割RNA碱基的哪一侧?
  RNase H裂解RNA的3'-O-P键，生成3'羟基和5'磷酸盐产物。
  
• 30℃时RNase H的活性怎么样?
  在30℃下，RNase H的活性约为90%。

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